異體CAR-T的研發(fā)關(guān)鍵是什么？

異體 CAR-T 的研發(fā)關(guān)鍵是解決免疫排斥問題。

異體 CAR-T 研發(fā)最大的障礙是其作為外源細(xì)胞，與患者的免疫系統(tǒng)之間存在嚴(yán)重的 排異反應(yīng)，這種免疫識(shí)別由 T 細(xì)胞表面表達(dá)的 T 細(xì)胞受體（TCR）和 1 型組織相容性復(fù) 合體（MHCI，由 HLA 基因編碼）的相互作用介導(dǎo)。

MHCI 表達(dá)在人體所有細(xì)胞表面，T 細(xì)胞通過識(shí)別 MHCI 來判斷細(xì)胞是否“異己”。因 此將外源的異體 CAR-T 細(xì)胞輸注至患者體內(nèi)時(shí)，異體CAR-T 上的TCR會(huì)識(shí)別患者 MHCI， 攻擊患者正常組織，從而引發(fā)移植物抗宿主病（GvHD）。因此，異體 CAR-T 研發(fā)最關(guān)鍵 的第一步是敲除異體 CAR-T 的 TCR。

同樣，患者體內(nèi)的 T 細(xì)胞也會(huì)識(shí)別異體 CAR-T 細(xì)胞上的 MHCI，引起宿主免疫細(xì)胞 排斥反應(yīng)（HvG），導(dǎo)致異體 CAR-T 迅速被清除。為了提升異體 CAR-T 持久性，一種方 法是敲除異體 CAR-T 的 MHCI，避免其被患者 T 細(xì)胞識(shí)別；另一種方法是通過 CD52 單 抗或 CD7 CAR 清除患者體內(nèi)的 T 細(xì)胞和 NK 細(xì)胞。

患者的免疫系統(tǒng)中，除了 T 細(xì)胞能夠清除異源細(xì)胞之外，NK 細(xì)胞也會(huì)識(shí)別不表達(dá) MHCI 的細(xì)胞并發(fā)揮殺傷作用。因此，對(duì)于敲除 MHCI 的異體 CAR-T 細(xì)胞，還需要解決 NK 細(xì)胞的排斥作用。一種方法是敲入非經(jīng)典的 HLA-E 基因，避免 NK 細(xì)胞的識(shí)別；另 一種方法是通過加載靶向 NK 細(xì)胞的 CAR 來清除患者體內(nèi)的 NK 細(xì)胞。

異體 CAR-T 的這些免疫排斥問題能夠通過基因編輯技術(shù)得到解決。Allogene Therapeutics 和 Cellectis 利用 TALEN 技術(shù)首先開發(fā)了異體 CAR-T 產(chǎn)品。Precision Biosciences 則利用其專利技術(shù) ARCUS 核酸酶實(shí)現(xiàn)編碼 TCR 的基因敲除，并在該編輯位 點(diǎn)精準(zhǔn)插入 CAR，開發(fā)初始版本的異體 CAR-T 產(chǎn)品。隨著 CRISPR 技術(shù)的成熟，CRISPR Therapeutics、Caribou 等多家公司也采用 CRISPR 基因編輯工具實(shí)現(xiàn)對(duì)免疫排斥相關(guān)基因 的敲除，進(jìn)行異體 CAR-T 產(chǎn)品研發(fā)。

除了基因編輯技術(shù)之外，也有部分公司采取非基因編輯技術(shù)開發(fā)異體 CAR-T 療法。 方德門達(dá)開發(fā)的 ThisCART 通用型 CAR-T 平臺(tái)技術(shù)，采用具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的膜蛋白胞 內(nèi)滯留技術(shù)，能夠避免基因編輯的脫靶風(fēng)險(xiǎn)，利用單一病毒載體即可同步實(shí)現(xiàn) CAR 的表 達(dá)和 GvHD 的消除。